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siRNA转染实验的一点心得

在siRNA干扰实验中,转染试剂的优劣直接决定了基因沉默的成败与数据的可靠性。我们实验室曾用过多款国内外siRNA转染试

在siRNA干扰实验中,转染试剂的优劣直接决定了基因沉默的成败与数据的可靠性。我们实验室曾用过多款国内外siRNA转染试剂,其中Starvio siRNA转染试剂和Lipofectamine RNAiMAX在众多转染试剂中性能最为突出。Starvio由海归公司--上海星启百代所研发,是国内首款第二代新型siRNA转染试剂,其首创的纳米胶束转染技术,能够使siRNA发挥出更高的基因沉默效率。而Lipofectamine RNAiMAX是由生命科学研究领域的领先品牌赛默飞所研发,专业应用于体外递送siRNA,被称为国际最为权威的siRNA转染试剂。二者性能可相媲美,相比而言,就成分方面,Starvio siRNA是可降解的生物纳米材料,显著提升了生物安全性的同时可实现更高的递送效率,而RNAiMAX 则是一种阳离子脂质体,虽经成分优化可拥有很高的转染效率但细胞毒性方面还是稍高一些。通过实验检测发现,RNAiMAX的细胞死亡率在15%左右,而Starvio siRNA则远低于前者,仅在5%左右,具有极低的细胞毒性,大大降低了细胞毒性对实验结果的影响;同时检测发现,RNAiMAX转染小核酸NC-FAM到Hela细胞的转染阳性率大于90%(如下图b所示),而Starvio siRNA则具有更高的转染阳性率,可达到95%以上(如下图a所示),丝毫不逊于国际权威品牌。

另外,在实验过程中,采用Starvio siRNA进行实验,不需要特殊的培养基,并且试剂盒内配有专业的转染增强剂,可有效降低细胞膜的免疫排异反应,显著提高转染效率的同时具有较高的性价比,采用RNAiMAX则需要单独购买特殊的Opti-MEM减血清培养基;此外,采用前者进行实验,在转染之后的4-6小时无需换液,省去繁琐步骤,同时避免可能带来的误差,而采用后者在转染之后的4-6小时最好进行换液。因此,相比之下,采用Starvio siRNA进行实验方案更加简单,操作起来更加简便,易于优化,并且也有助于确保获得更好的转染性能。

总的来说,对于普通耐受度较高的细胞,Starvio siRNA和Lipofectamine RNAiMAX这两款转染试剂性能都很不错,均可选择;但对于耐受度较低且敏感度较高的细胞来说,最好选择细胞毒性更低的Starvio siRNA试剂,能提供更温和、更高效的siRNA递送效果,同时具有极具竞争力的价格,减轻研究者经费预算压力。